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ELISA不常见样本的处理方法—痰液样本
人阅读 发布时间：2020-08-25 22:21
ELISA（酶联免疫吸附剂测定）是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法，样本的处理对于ELISA实验的成功有着举足轻重的作用。 利用ELISA进行检测的样本类型包括常见的血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴道分泌物等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到
ELISA实验的结果。下面就不常见ELISA痰液样本处理方法的整理，希望对您有所帮助。
方法一：
1）选择痰液中较为粘稠部分称重， 加两倍于痰量的 0.1% DTT(二硫苏糖醇)。DTT 的主要作用是溶解粘液，用吸管反复吹打，漩涡器振荡 15s，37 度恒温水浴振荡 5 分钟；
2）加入两倍于痰量的 PBS 缓冲液继续振荡 15-20 分钟，150 目的金属丝网过滤，1500 rpm 离心 10 分钟吸取上清液检测。
处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。样本的处理是实验成功的第一步， 以上就是关于 Elisa 特殊样本处理方法的简述，供研究者参考。
方法二：
根据标准方案收集并制备诱导痰：1）分离粘液，2）测量粘液，3）添加与粘液相同体积的二硫苏糖醇（0.1%），4）涡流，5）使用滤纸并收集过滤液，6）300 g离心30 min，7） 分离上清液并保持在−20°C。
参考文献：
Majd, A. M. M., S. Faghihzadeh, S. Pourfarzam, M. Eghtedardoost, D. Jamali, E. S. Mirsharif, R. Dilmaghanian and T. Ghazanfari (2019). "Serum and sputum levels of IL-17, IL-21, TNFalpha and mRNA expression of IL-17 in sulfur mustard lung tissue with long term pulmonary complications (28years after sulfur mustard exposure)." Int Immunopharmacol 76: 105828.
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