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杭州联科生物技术股份有限公司
入驻年限：13 年
- 联系人：
李先生
- 所在地区：
浙江 杭州市 萧山区
- 业务范围：
抗体、细胞库 / 细胞培养、实验室仪器 / 设备、医疗器械、体外诊断
- 经营模式：
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ELISA常见问题与对策（四）
人阅读 发布时间：2020-08-25 17:22
Q8：做ELISA实验的时候，有哪些需要注意的点？
Q9：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？
温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。
Q10：如何获得良好线性的标准曲线？
按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末；确保标准品完全溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液；显色的恰当终止；选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。
Q11：ELISA实验为什么必须设置复孔
Q12：为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡？如何振荡？
振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。
Q13：为什么酶标仪读数时必须选用双波长？
首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰（标本的浓度，干扰色等）。一般采用最大波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值最小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收；因此，双波长测定，可最大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。
ELISA是蛋白定量检测的金标准，同时对实验操作的要求也极其严格。如果您希望获得准确、稳定的结果，希望拥有完美的数据分析，请选择联科生物，我们将在标准化的操作流程下为您提供高质量的检测服务。具体操作请参见说明书或致电联科生物（400-6721-600）。
相关文章请点击以下标题：
ELISA常见问题与对策（一）
ELISA常见问题与对策（二）
ELISA常见问题与对策（三）
- 移液操作时，酶标板孔中要垂直悬空加入液体，避免加到孔壁上；
- 实验前将所有试剂平衡至室温；
- 标准品粉末溶解前需要先短暂离心，使管内标准品全部集中在管底；
- 实验要做复孔，减少误差；
- 振荡孵育，加强反应；
- 每次洗板必须将洗液弃干净；
- 酶标仪检测前预热，双波长检测；
- 注意显色判断，适时终止。
Q9：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？
温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。
Q10：如何获得良好线性的标准曲线？
按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末；确保标准品完全溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液；显色的恰当终止；选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。
Q11：ELISA实验为什么必须设置复孔
- 为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。因为复孔检测可以：
- 计算平均值，确保实验结果更准确；
- 解决实验中误操作造成的跳孔现象；
- 计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。
Q12：为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡？如何振荡？
振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。
Q13：为什么酶标仪读数时必须选用双波长？
首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰（标本的浓度，干扰色等）。一般采用最大波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值最小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收；因此，双波长测定，可最大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。
ELISA是蛋白定量检测的金标准，同时对实验操作的要求也极其严格。如果您希望获得准确、稳定的结果，希望拥有完美的数据分析，请选择联科生物，我们将在标准化的操作流程下为您提供高质量的检测服务。具体操作请参见说明书或致电联科生物（400-6721-600）。
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ELISA常见问题与对策（一）
ELISA常见问题与对策（二）
ELISA常见问题与对策（三）
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