ELISA常见问题与对策（二）_公司新闻

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人阅读发布时间：2020-08-25 17:20

Q3：背景深（通常ELISA背景OD值<0.2），整板有颜色，可能的原因及解决方法：

序号	可能原因	解决方法
1	ELISA板子不正确的贮存	酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的ELISA板
2	没有正确封闭	在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间
3	不正确的孵育时间，温度（尤其是底物孵育的时间）	最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2-8℃。完全按照说明书要求
4	偶联抗体（streptavidin-HRP）浓度过高	按照说明书调整到最佳的浓度
5	洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留	洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染
6	底物污染，未避光保存，出现颜色	弃去底物，重新配置
7	样品稀释液污染	弃去稀释液，重新配置
8	吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底	吸头尽可能一次性使用
9	样本溶血严重	建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高

Q4：ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因：

1、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围。ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因：

序号	可能原因	解决方法
1	OD绝对值靠谱，则显色过度	TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止
2	仅做单波长检测	由于参考波长读取非特异性检测，如指纹、划痕、水渍等，对结果也有影响。建议双波长测定。

2、标准曲线最高点吸光值偏低ELISA标准曲线最高点的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：

序号	可能原因	解决方法
1	粉末标准品未充分溶解	粉末标准品按说明书加一定体积的液体后，轻柔混匀，室温静置30分钟，充分溶解
2	标准品反复冻融	标准品反复冻融后活性降低
3	孵育温度、时间	按说明书操作
4	显色时间控制	TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止

3、标准曲线无梯度，ELISA 实验中标准品2倍倍比稀释，但结果分析标准曲线没有梯度，可能的原因：

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