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杭州联科生物技术股份有限公司
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咨询公司新闻/正文
ELISA常见问题与对策(一)
人阅读 发布时间:2020-09-22 13:36
Q1:ELISA实验加完底物显色后,所有孔都无色,阳性对照也很弱,什么原因呢?
Q2:ELISA实验结果常见问题及解决方案——显色淡灵敏度偏低
相关文章请点击以下标题:
ELISA常见问题与对策(二)
ELISA常见问题与对策(三)
ELISA常见问题与对策(四)
序号 | 可能原因 | 解决方法 |
1 | 不同试剂盒或不同批号的试剂混用 | 建议使用同批次试剂盒。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂 |
2 | 标准品稀释方法错误/或标准品有问题 | 请按照说明书所示配置说明书,注意单位和稀释倍数 |
3 | 未加酶结合物而认为已加入 | 注意不要漏加 |
4 | 终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用 | 每次加液前均应看清标签 |
5 | 显色液变质 | 更换新的显色液 |
6 | 洗涤液配制有误 | 请按说明书所示稀释倍数配制 |
Q2:ELISA实验结果常见问题及解决方案——显色淡灵敏度偏低
序号 | 可能原因 | 解决方法 |
1 | 试剂盒未充分平衡 | 试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟, 确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。 |
2 | 样品不适合做ELISA检测 | 样品一般选择培养上清、血清、血浆。 其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)。 |
3 | 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 | 防止板过于干燥。 |
4 | 包被抗体遭到破坏 | 操作温和,移液枪不能碰到孔底。 |
5 | 样本和抗体孵育条件不合适 | 按照说明书条件,建议孵育过程中全程振荡孵育。 |
6 | 洗涤浸泡时间过长 | 按照说明书操作,勿人为增加浸泡时间。 |
7 | 偶联HRP试剂污染 | 弃去试剂,重新配置。 |
8 | 错误的稀释偶联HRP试剂 | 弃去试剂,重新配置。 |
9 | TMB底物孵育时间过短,因非人为因素影响, 需要优化孵育时间 |
确定合适的孵育时间:人为判定-最高浓度S1出现深蓝色,S4-5有淡蓝色。 或机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65。 |
10 | 样本浓度过高或存在基质效应 | 建议做不同稀释倍数,确认样本最佳稀释倍数。 |
11 | 酶标仪滤光片设置有问题或者波长选择不对 | 确认仪器设置及选择正确的波长检测。 |
12 | 酶标板不适合做ELISA | 不能使用细胞培养板,建议使用ELISA专用高吸附力板子。 |
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