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ELISA常见问题与对策(一)

人阅读 发布时间:2020-09-22 13:36

Q1ELISA实验加完底物显色后,所有孔都无色,阳性对照也很弱,什么原因呢?
 
序号 可能原因 解决方法
1 不同试剂盒或不同批号的试剂混用 建议使用同批次试剂盒。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂
2 标准品稀释方法错误/或标准品有问题 请按照说明书所示配置说明书,注意单位和稀释倍数
3 未加酶结合物而认为已加入 注意不要漏加
4 终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用 每次加液前均应看清标签
5 显色液变质 更换新的显色液
6 洗涤液配制有误 请按说明书所示稀释倍数配制

Q2ELISA实验结果常见问题及解决方案——显色淡灵敏度偏低
 
序号 可能原因 解决方法
1 试剂盒未充分平衡 试剂盒从28℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,
确保所有试剂已平衡至室温(约
25℃)。
2 样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血清、血浆。
其他样品形式可能不适合做
ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)。
3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥。
4 包被抗体遭到破坏 操作温和,移液枪不能碰到孔底。
5 样本和抗体孵育条件不合适 按照说明书条件,建议孵育过程中全程振荡孵育。
6 洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作,勿人为增加浸泡时间。
7 偶联HRP试剂污染 弃去试剂,重新配置。
8 错误的稀释偶联HRP试剂 弃去试剂,重新配置。
9 TMB底物孵育时间过短,因非人为因素影响,
需要优化孵育时间
确定合适的孵育时间:人为判定-最高浓度S1出现深蓝色,S4-5有淡蓝色。
或机器判定
620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65
10 样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数,确认样本最佳稀释倍数。
11 酶标仪滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。
12 酶标板不适合做ELISA 不能使用细胞培养板,建议使用ELISA专用高吸附力板子。


相关文章请点击以下标题:
ELISA常见问题与对策(二)
ELISA常见问题与对策(三)
ELISA常见问题与对策(四)

 

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