师弟：师兄师姐总结的干货，ELISA操作中遇到大问题全在这里了！
	师妹：哈哈，有了这份笔记，再也不用为了实验问题拍师兄师姐马屁了。

Q1：我的样本如何处理、收集、保存？有没有建议？

1.细胞培养上清

细胞培养液在2500rpm/min 离心20分钟后，收集上清即刻检测， 或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。

2．血清样本

分离管分离血清。在 1000 g 离心之前，使血样凝集 30 分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。

3. 血浆样本

EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。在血样收集 30分钟内离心收集样本。即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。

注意：不要使用严重溶血或高血脂的样本。所有样本收集后，应及时分装并贮存于-20℃。如果在 24 小时内检测，样本可以存放在 2 - 8℃。避免样本的反复冻融。在分析前，冷冻样本应该缓慢的恢复至室温，轻柔地混匀。检测前，样本中可见的沉淀必须去除。

Q2：样本反复冻融， 对ELISA检测的影响有多大？

答：样本反复冻融对蛋白影响非常大，易导致蛋白降解；一般来说血清/血浆（蛋白含量丰富）样本冻融1-2次，影响不大；但是其他样本类型，比如细胞上清/肺泡灌洗液，冻融1-2次后，蛋白降解严重，不适合再用于ELISA。

Q3：ELISA实验已设阴性对照，还需空白对照吗？

答：空白对照和阴性对照有区别的。空白对照，仅用稀释液代替检测样本，用以观察最终反应的显色“本底”，并用于酶标仪消除、扣除“本底”，即以本底为“零’，读取阳性、阴性对照孔和样本孔的吸光值。阴性对照，是本实验检测与待检物有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素之间的差异。

 

	师姐：保留一点下期再总结吧。
	师兄：大事不好，这个干货太厉害了，透漏的太多了。