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ELISA通关必备丨基础知识

343 人阅读发布时间:2023-08-24 13:37

ELISA通关必备丨基础知识

 

ELISA
Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay

酶联免疫吸附检测,利用抗原抗体的特异性反应,对样本中可溶性目的产物进行定量检测。

技术资料图片1


ELISA 与常规免疫实验对比

ELISA样本制备简单;灵敏度高(pg/ml);特异性强;重复性好;操作简单;检测仪器易获得。

WESTERN BLOT IHC/IF ELISA
定性 定性 定性
半定量 半定量 定量
半定位 定位 非定位
灵敏度中 灵敏度中高 灵敏度高
组织/细胞匀浆 组织/细胞切片 血清/血浆/细胞培养上清/体液/组织匀浆
对指标定位没有要求 胞内蛋白/膜蛋白 分泌蛋白/细胞因子

ELISA 种类

常见的ELISA四种,双抗夹心法、直接法、间接法、竞争法。近年,双抗夹心法中的一步法及多因子检测新技术也逐渐成熟。

技术资料图片2

不同 ELISA 检测方法比较

方法 适用范围 优势 劣势 备注
双抗夹心法 检测抗原最常用的方法,检测各种蛋白质大分子抗原 高灵敏、特异性强,抗原无需事先纯化 抗原必须拥有两个以上的结合位点 不能检测小分子抗原或半抗原,甄选抗体对,避免交叉反应或竞争相同的抗原结合位点
直接法 检测抗体最常用的方法,对于病原体抗体检测和诊断 操作简便,无需二抗,可以避免交叉反应 一抗需要酶标记,不是每种抗体都适合做标记,费用较高 一抗特异性非常重要
间接法 同上 二抗可以加强信号 交叉反应发生几率高 抗原纯度重要
竞争法 适用于检测特异性抗体,抗原中有不易去除的干扰物 快速、高效 整体的敏感性和专一性较差 主要适用于小分子和半抗原检测,如PEG2、Cortisol

ELISA 应用场景

ELISA测抗原

  • 细胞因子检测:TNF、VEGF、白介素等;
  • 肿瘤标志物:甲胎蛋白、癌胚抗原等;
  • 激素:胰岛素、雌二醇、皮质醇等;
  • 载脂蛋白:ApoA-l、Apo-E等;
  • 检测血液中的药物浓度:治疗心脏病的药物、抗生素庆大霉素等。

ELISA测抗体

  • 病毒检测:流感病毒、腮腺炎病毒、脑炎病毒、狂犬病毒等检测;
  • 自身免疫病抗体测定;
  • 过敏诊断:检测过敏原的抗体。

ELISA 应用领域

技术资料图片3

资料格式:

ELISA基础知识.docx

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