流式细胞术是当代先进的细胞分析技术之一，包括细胞计数、细胞内/外抗原分子检测、细胞中DNA和RNA的倍体分析、细胞的生物学特性及功能分析等。

对于流式细胞分析而言，样本制备的好坏对最终的检测结果有很大的影响。在免疫学和血液学中，应用流式细胞术分析的样本多为外周血、骨髓、各类体液（如脑脊液、胸水、腹水）以及人体的组织（如淋巴结、脾、肝等），这几种样本要如何制备和保存呢？  

 

外周血/骨髓

• 保存方法

收集样本后置于加有抗凝剂（一般选择肝素或EDTA）的试管中，室温保存，尽量在12 h内处理样本；若无法及时处理，4℃保存，此时最好选择肝素抗凝管。

• 处理方法

一般不需要特殊处理制备单细胞悬液，所用试剂为淋巴细胞分离液和红细胞裂解液。但在临床检测中，为了避免细胞成分丢失，通常不推荐使用淋巴细胞分离液分离单核细胞。

• 抗凝剂的选择

血液标本可以使用EDTA、ACD（枸橼酸葡萄糖）或肝素抗凝。

一般认为，ACD和肝素抗凝的样本72 h内细胞是稳定的；EDTA抗凝48 h内是稳定的。EDTA适用于白细胞的免疫表型分析，可防止成熟的髓系细胞贴壁造成细胞损失，并具有较强的抗血小板凝集能力，但对细胞活性的保持不如肝素抗凝。同时EDTA是二价阳离子的强螯合剂，会影响与Ca2+相关的抗原位点（如CD11b等），并会抑制与Ca2+ 相关的细胞功能。肝素常用于白细胞功能研究，可维持Ca2+和Mg2+在细胞内的生理浓度，更好保持细胞活性，适用于放置时间较长、不能及时检测的样本，但不适合血小板的相关检测。骨髓样本优先选择肝素抗凝。

 

体液

 

• 保存方法

收集样本后置于肝素抗凝管中，室温保存，且尽量在12 h内处理样本。若无法及时处理，则4℃保存，时间最好不超过48 h。

• 处理方法

1. 样本1000-1500 rpm离心5 min，弃去上清；
2. 加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液（PBS），离心洗涤5 min；
3. 加入适量PBS重悬。如有细小沉淀，用300目尼龙网过滤后备用。

 

 

组织

 

• 保存方法

切取新鲜组织样本置于生理盐水或PBS中，室温保存，尽量在12 h内处理样本；若无法及时处理，4℃保存，保存时间最好不要超过48 h。不建议用甲醛、乙醇固定细胞，不要用酶、表面活性剂处理细胞。

• 处理方法

常用的组织样本制备单细胞悬液方法有：机械法、酶处理法、化学试剂处理法及表面活性剂处理法，在流式分析中，为保持抗原活性，多采用机械法处理样本。采用机械法需注意动作轻柔，尽量减少细胞的损伤。

若实验室无单细胞制备仪，手工剪切制备单细胞悬液：

1. PBS清洗组织样本，去除大量红细胞；
2. 用眼科剪将组织剪成极小块，再次PBS清洗；
3. 组织小块加入匀浆器中，加少量PBS匀浆；
4. 用细注射针头抽取细胞悬液；
5. 300目尼龙网过滤；
6. 加入含0.1%牛血清白蛋白的PBS；
7. 1000-1500 rpm离心5 min，弃去上清；
8. 加入适量PBS重悬。