流式细胞术（FCM）常用于测定细胞表面/胞内/核内抗原对细胞进行免疫表型分析，在胞内/核内抗原检测时，可能会碰到“有与没有都一样”的尴尬情况，明明胞内有这个抗原但硬是检测不到。此时，当排除了实验误操作、抗体非特异性、标记淬灭等情况，不妨回头看看是否破膜问题吧。
 

01 为 何 要 用 破 膜 剂？

正常情况下，荧光标记的抗体无法通过完整的细胞膜进入细胞内，用流式细胞仪测定细胞内抗原，需先利用破膜剂破坏细胞膜的完整性，产生可供抗体通过的小孔。破膜效果的好坏将直接影响荧光染色和结果分析。

02 破 膜 剂 选 择 原 则

① 尽量保持细胞形态，使可根据散射光信号分析细胞种类，如区分淋巴细胞、单核细胞和粒细胞；

② 不影响细胞膜表面抗原与抗体的特异性结合（若需同时检测细胞内外抗原）。

03 常 见 破 膜 剂

① 皂素；

② 有机溶剂：乙醇、甲醇、丙酮等；

③ Triton-X、Tween-20。

04 优 劣 势 对 比

① 细胞形态影响：利用皂素破膜，外周血细胞的流式散射光图中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞分群清晰；而另两种破膜剂，通过与细胞膜上的蛋白质和脂质作用发挥破膜效果，易导致细胞发生皱缩，这3群细胞很难分开；

② 对抗原影响：a.标记表面抗原和破膜两步操作的先后顺序有所影响：以检测表面CD8为例，先标记再破膜对CD8无明显影响，而先破膜再标记，乙醇和Triton-X会使表达CD8细胞比例和每个细胞上抗原表达量急剧下降；b.对不同抗原的影响不同：如检测IFN-γ时，Triton-X破膜会导致其检测率降低，而皂素和乙醇无影响；检测TNF-α时，皂素的敏感性要高于其他两种。

③ 其他：皂素的破膜效果是可逆的，一旦被洗掉容易导致破膜失效，因此在后续实验过程中需用含有皂素的洗涤液洗涤；有机溶剂可实现固定和破膜；Triton-X和Tween-20相似，可破坏所有脂质层，可破核膜。总体来说，皂素是相对理想的细胞破膜剂，但无法破核膜，若需破核膜还是要用Triton-X和Tween-20。

 

联科生物 破膜剂

 

联科生物固定破膜剂（Fix&Perm）质量优秀，操作简单，深受广大科研人员好评与喜爱，具有以下三大优点：

✦   破膜后细胞分群保持完好

✦   溶血、破膜、染色一步完成，节约成本，操作简便
✦   保持抗体的特异性、灵敏度以及可重复性

联科生物可提供Fix & Perm Kit固定破膜剂，包含A液和B液两种组分，可将细胞固定、减少对表面抗原的影响，并增加细胞膜的通透性，使荧光素标记的抗体可通过细胞膜与抗原结合。同时B液还可高效裂解红细胞，无需另外处理，减少对细胞的影响。【A液固定，B液破膜】
 

目录号	产品名称	规格	目录价
70-GAS003/2	Fix & Perm Kit 固定破膜剂	50T	560
70-GAS005/2	Fix & Perm Kit固定破膜剂	100T	1060
70-GAS006/2	Fix & Perm Kit固定破膜剂	200T	1960