杭州联科生物技术股份有限公司 品牌商

9 年

手机商铺

商家活跃:
产品热度:
品牌商

杭州联科生物技术股份有限公司

入驻年限:9 年

  • 联系人:

    秦少芳

  • 所在地区:

    浙江 杭州市 拱墅区

  • 业务范围:

    抗体、细胞库 / 细胞培养、实验室仪器 / 设备、医疗器械、体外诊断

  • 经营模式:

    代理商 生产厂商 科研机构 医院药店

在线沟通
推荐产品

公司新闻/正文

MTT法检测细胞增殖

人阅读 发布时间:2020-11-17 09:16



MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。


检测步骤

◆ 1.将细胞板放置于无菌操作台中(细菌可以导致MTT比色OD值的升高)

◆ 2.在每管MTT(5 mg/每管)中加入1 mL MTT Solvent溶解。在细胞板中每孔加入10%体积的MTT溶液。

注:MTT 对光敏感。重溶的MTT溶液冻存于0℃以下时的稳定性可至少保持6个月。重溶的MTT溶液如保存于2 - 8℃超过2周,则可能会降解,导致错误的结果。

◆ 3.将细胞板放回培养箱中继续孵育3 - 4小时。做对比试验时,孵育时间需一致。

◆ 4.孵育后将细胞板从培养箱中拿出,按照下面的方法溶解产生的MTT甲臜结晶物。

a. 如果是贴壁细胞,则弃去培养基。加入与初始体积等量的Formazan Solvent。每孔的溶解液体积可能不同,但为了方便比较,总体积须保持一致。

b. 如果是非贴壁细胞先离心去除上清液,再加入与初始体积等量的Formazan Solvent。

c. 加入 Formazan Solvent后,须在1小时内完成读数。

◆ 5.在摇床中温和地振荡可增强溶解。某些情况下,尤其是细胞密度较高时,需要反复吹打使 MTT甲臜结晶物完全溶解。

◆ 6.将细胞板放置于无菌操作台中(细菌可以导致MTT比色OD值的升高)。

 

注意事项

◆ 1. 一般情况下,96孔培养板内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,保证MTT结晶形成的量与细胞数呈线性关系;

◆ 2. 为了得到好的结果,细胞数量应在对数生长期进行测定。每次检测需包括不含细胞的培养基作为空白对照;

◆ 3. 细胞消化会影响细胞的活性,进而影响OD值。容易消化的细胞,消化时胰蛋白酶中不添加EDTA,消化时也仅需胰酶浸润数秒即可;难以消化的细胞,胰蛋白酶中需添加浓度为0.25%的EDTA;

◆ 4. MTT转化为甲臜是依赖于细胞类型的。由于相同细胞系不同细胞株之间的差异,以及细胞的生理状态影响,因此推荐研究者建立自己的吸光度/细胞数量曲线;

◆ 5.细菌、支原体和其他微生物污染可能会使MTT四唑环断裂,不能用该方法测定;

◆ 6. 用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值,增加试验本底。因此,一般选含小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。

◆ 7. CCK-8法也是常见的细胞增殖检测方法,底物被细胞中的脱氢酶还原,生成黄色的产物(甲瓒),可溶于培养基。相较于MTT,CCK-8具有如下优点:①单一组分,无需预混,即开即用;②操作简便,只需一步即可得到结果;③无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低;④水溶液,无需换液,尤其适合悬浮细胞。

 

细胞增殖检测相关试剂盒
 

目录号 产品名称 规格
70-MTT MTT细胞增殖检测试剂盒 100/200/500/1000 assays
70-CCK8 CCK-8细胞增殖检测试剂盒 100/200/500/1000/3000/10000 T
70-CP001 BrdU Cell Proliferation Assay Kit 细胞增殖试剂盒 50 T

上一篇

视频:Th1/Th2检测操作演示

下一篇

著名的ACE2来啦—11月ELISA新品

更多资讯

询价列表

暂时没有已询价产品

快捷询价 发送名片
    当你希望让更多商家联系你时,可以勾选后发送询价,平台会将你的询价消息推荐给更多商家。
    yanxuan

    丁香通研选

    yanxuan

    丁香通小程序

    询价知情同意
    您知悉并同意,丁香通平台展示产品并非为平台自身产品,您发起询价或试用申请后,平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家,由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买,因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝,但您知悉将无法参加询价或试用活动。