（一）ELISA 基 础 知 识

• ELISA = Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay ：酶联免疫吸附检测，利用抗原抗体的特异性反应，对样本中可溶性目的产物进行定量检测。

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• ELISA与常规免疫实验对比：
• ELISA特点：ELISA样本制备简单；灵敏度高（pg/ml）；特异性强；重复性好；操作简单；检测仪器易获得（酶标仪）。
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ELISA种类

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• 各种ELISA特点

方法	适用范围	优势	劣势	备注
双抗体夹心法	检测抗原最常用的方法，检测各种蛋白质大分子抗原。	高灵敏、特异性强，抗原无需事先纯化。	抗原必须拥有两个以上的结合位点。	不能检测小分子抗原或半抗原，甄选抗体对，避免交叉反应或竞争相同的抗原结合位点。
直接法	检测抗体最常用的方法，对于病原体抗体检测和诊断	操作简便，无需二抗，可以避免交叉反应	一抗需要酶标记，不是每种抗体都适合做标记，费用较高	一抗特异性非常重要
间接法		二抗可以加强信号	交叉反应发生几率高	抗原纯度重要
竞争法	适用于检测特异性抗体 抗原中有不易去除的干扰物	快速、高效	整体的敏感性和专一性较差	主要适用于小分子和半抗原检测,如PEG2、Cortisol

 

• ELISA应用场景

（二）八 大 质 控 指 标 

不是所有的ELISA试剂盒开发都如此严格！
 

联科生物每个指标的ELISA试剂盒都进行了8大指标的质控。6项专利。ISO9001质量管理体系。值得您信赖！

 

（三）ELISA  实 验 步 骤

 

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• ELISA简要步骤（双抗体夹心法）

 

 

• （四）ELISA  操 作 注 意 事 项
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（五）标 准 曲 线 拟 合

    标准品浓度和相应的吸光度（OD）值如果能够呈现直线关系是最理想的，这时可以通过Excel等方便的获得拟合曲线，进而推算出样品的浓度值。但我们做免疫检测很少能够有这么理想的情况，标品浓度和相应OD值往往是"S"型的曲线关系，这时就不能用直线拟合的方式了，而对拟合方法进行选择就是必要的了。
   
    关于标准曲线的拟合方式，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反应中的曲线拟合，但都只适用于曲线的一部分。 Logistic曲线则对曲线的全部都有较好的适用性。在一个长的区间内，Logistic应该都能拟合得较为理想。但建模型是一回事，而用它来定量是另一回事。如果用来定量，S形曲线的中间段（较陡处）是比较好的，而两端的平坦部分计算误差会大，有时甚至会很大。
 
    所以关键在于你检测的样品浓度在曲线的哪一部分。在S曲线的低浓度部分可以用乘幂方程很好的拟合，中低浓度部分可以用直线方程，中间部分可用对数方程，而中后段可用四参数。

    目前国际上流行的免疫检测拟合方式是“四参数逻辑拟合"，用这种拟合方式往往能够比较精确的反映浓度和吸光度的曲线关系，从而获得比较正确的样品中待测物质的浓度值。