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杭州联科生物技术股份有限公司
入驻年限：13 年
- 联系人：
李先生
- 所在地区：
浙江 杭州市 萧山区
- 业务范围：
抗体、细胞库 / 细胞培养、实验室仪器 / 设备、医疗器械、体外诊断
- 经营模式：
代理商 生产厂商 科研机构 医院药店
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流式细胞术—样本制备
人阅读 发布时间：2020-08-26 02:21
血液标本
用肝素抗凝管采集静脉血 （必须用肝素钠抗凝, 不可用肝素锂、EDTA 或枸橼酸钠） 1～2 ml，血液室温放置，8 小时内必须进行检测，否则需弃用。
外周血单个核细胞（PBMC）标本
肝素抗凝管采集静脉血至少 2 ml，采集后 4 小时内使用；
加入等体积的 HBSS（Hank平衡盐缓冲液，pH7.2～7.4）稀释血液；
取与稀释后血液等体积的淋巴细胞分层液（Ficoll液）加入离心管中；
将稀释血液小心地加到淋巴细胞分层液上，注意保持两者界面清晰；
室温下，2000 r/min，离心20分钟；
用毛细吸管轻轻吸出单个核细胞层，加入含有5 ml HBSS 的试管中，充分混匀；
1500 rpm，离心5分钟，弃上清后，再洗一次；
弃上清，用RPMI 1640（含10%热灭活FBS）重悬单个核细胞，用台酚兰染色计数活细胞数（应在95%以上）；
调节细胞浓度为 2×106细胞/ml。
分离关节滑液中的单个核细胞
将关节滑液置含肝素（终浓度5 IU/ml）的离心管中，离心1000×g 15分钟。
用含2％灭活小牛血清的Hanks液悬浮沉淀细胞，离心1000×g 15分钟，去上清。用含2％灭活小牛血清的Hanks液悬浮细胞至原容量。
用淋巴细胞分离液分离关节滑液中的单个核细胞，并用含10％小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。
分离组织中的单个核细胞
取外科分离的各种组织，用含1％庆大霉素和1％小牛血清的MEM培养液洗涤组织块，洗去可能的污染物。将组织块置培养皿中，加入约为组织块体积5~10倍的同样MEM培养液。用无菌外科剪刀将组织块剪碎成0.5 mm3大小。
将组织块转移到小培养瓶中，静置片刻，吸去培养液。加入约2倍组织块体积的、滤过除菌的酶溶液。37℃水浴摇床中消化1～2小时，注意组织块的消化程度。
当组织块消化分散后，用手用力摇晃培养瓶3～5分钟或用大口吸管反复吹打，使细胞团进一步分散。加入30 ml上述MEM培养液，终止酶反应。
让上述悬液通过200目的金属网或尼龙网，分离单个细胞。用上述MEM培养液洗涤细胞3次，每次离心1000×g 10分钟。用1％台盼蓝染色法检测细胞活力并计数细胞。
如果细胞量较多（>107），应当用上述淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，并用含10％小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。
从小鼠胸腺中分离胸腺细胞
脱臼或剪头处死小鼠，置75％乙醇中浸泡消毒。腹面向上固定，剪开小鼠胸腔，暴露和摘取胸腺。在平皿中用Hanks液洗净血液，去除结缔组织。
在有少量细胞培养液的平皿中，用镊子梳理胸腺，再用大口吸管反复吹打，分离单个细胞。离心沉淀细胞，用细胞培养液洗涤细胞1次。加入适量细胞培养液，静置5分钟，让大的组织块自然沉降，吸出单个胸腺细胞。
用1％台盼蓝染色法检测细胞活力，计数细胞。再用含10％小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。
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