上一篇我们介绍了移液器的维护、校准，大家是否认识到，原来每天都要用的“枪”，并没有想象的那么简单！
那么今天，我们将推出下篇，介绍移液器的使用。良好的移液操作规范，是实验成功的开始！
一次移液操作，看似短短几十秒的瞬间，实际却可分解为装吸头、量程设定、润洗吸头、吸液、排液和吹液、以及退吸头六个步骤。
 

 

第一步：装吸头

√  正确操作：

移液器套柄用力下压并小幅度旋转即可

×  错误操作：

用力敲击吸头。这样操作的后果是：

1. 吸头变形影响准确性；

2. 套柄在强力摩擦下磨损，影响密封，从而影响准确性；

3. 小量程移液器的套柄比较细，用力敲击可能会损坏套柄。

该步的不规范操作，在很多实验室经常能看到，可能大家习以为常，然而长此以往就会影响移液器的寿命和准确性！
★  该步骤不规范的移液操作可能带来0.1%到5%的移液误差，甚至更高！

 

第二步：量程设定

1.量程的设定原则：由大到小

1. 1 由大量程向小量程调节时：

如从600μl调节至400μl，直接调节

1.2.  由小量程向大量程调节时：

先朝所需量程方向连贯旋转，旋转到达超过所需量程1/3圈处，回调到所需量程处

如从20μl调节至50μl，先调节至53μl，再回旋至50μl

这是因为由小量程向大量程调节时，弹簧的弹性形变在短时间内无法完全回复，需有一个恢复阶段，可以想象一下刚从沙发上起身时，沙发垫恢复原状也是需要一定时间的。

★ 正确的量程设定可以提高0.5%的移液准确性！

2.量程范围的选择：

选择量程时，需要注意，一般在 10% - 100% 量程范围内可以操作，但在 10% 量程操作需要较高的操作技巧。因此建议的最佳量程是35% - 100% 量程范围。在此量程范围，对操作技巧依赖更少，并保证移液的准确性和精度。从表中可以看出，当选择的量程越小，移液的准确性和重复性就会越差。

★ 选择合适的吸头量程，可提高1%移液准确性！

第三步：润洗吸头

用同一样品对吸头进行润洗。先吸取样品，然后排回样品池或废液槽。充分吸液排液2-3次。

润洗的作用：

1. 在吸头内形成同质膜，降低吸头对样品的吸附；

2. 有助于提高吸头多次相同移液操作的一致性。

注意：对于高温/低温样品，由于热胀冷缩带来更大的误差，不建议润洗。

★ 润洗吸头可提高0.5%的移液准确性!

 

第四步：吸液

此步影响移液准确性的因素主要有以下4点：

1. 吸头浸入角度

建议尽量保持垂直，倾斜角度不大于15°。

正确的移液角度，可提高2.5%移液准确性！
 

2. 吸头的浸入深度

移液器量程 吸头浸入深度 10μl及以下 1mm 20μl – 100μl 2 – 3mm 200μl – 1000μl 3 – 6mm 2000μl及以上 6 – 10mm

吸头的外壁会粘上液体，尤其是液体较粘稠时，对准确性影响更大！

★ 以正确吸头浸入深度进行吸液操作可提高1%的移液准确性(微量程移液器可达5%)！

3. 吸头浸入时间

吸液后保持吸头浸入液面最少1秒，然后将吸头平缓移开液面。对吸取大容量样品或者高粘度样品尤为重要。

4. 吸液速度

吸液通常采用一档吸液、二挡排液，在吸液时保持平顺，缓慢松开活塞，控制好吸液速度。过快的吸液速度，会导致形成气柱，使移液不准确；样品液进入套柄，对活塞和密封圈造成损伤；带入气雾，造成样品交叉污染。

★ 不正确的吸液速度会导致至少5%的准确性下降！

第五步：排液和吹液

先将排液按钮按至第一档(排液档)，略作停顿以后，再按至第二档(吹液档)

常规排液操作：

1. 沿内壁排液(常规)

2. 直接排入液面下

   直接排入液面排液时要保持活塞下压再离开液面，否则容易导致倒吸！

3. 在液面上方排液

★ 正确的排液技术提高1%的移液准确性！

操作一致性

保持一致的移液节奏，使活塞下压的速度和平稳一致

为了达到好的操作一致性，可选择使用电动移液器，减少人为操作的影响

操作的一致性可提高1%的移液准确性！

★ 窍门：反向移液模式

适用于高粘度、挥发性的样品，如甘油、乙醇等，提高移液的准确性

同常规移液操作相反的流程，即二挡吸液、一档排液，具体操作请见下方


•  常规正向移液分为4步：

1. 将按钮从准备位置压到第1档；

2. 吸液：缓慢释放按钮，回复至准备位置；

3. 排液：将按钮从准备位置压到第1档，略作停顿后，将按钮压到第2档；

4. 松开按钮，回复至准备位置。

•  反向移液分为5步：

1. 将按钮从准备位置压到第2档；

2. 吸液：缓慢释放按钮，回复至准备位置；

3. 排液：将按钮从准备位置压到第1档；此时已完成所需体积液体的移液。

4. 将按钮从第1档压到第2档，回收或弃去吸头中残留的液体；

5. 松开按钮，回复至准备位置。
 

移 液 小 结

 

误差大小	误差范围 %	技术操作
大	1.0%- 5.0%	吸头浸入深度/角度不正确(特别注意微量程移液器) 错误的吸液速度
中	0.5% -1.0%	选择合适的量程 吸头浸入深度 吸液速度 排液技术 一致性
小	小于 0.5%	量程设定 (已选合适量程) 吸头浸入角度 润洗 手温影响

好了，本期的移液器操作介绍就到此为止了，希望能给您的实验带来帮助！
后续将会给大家带来关于ELISA原理、操作、分析等方面的介绍