1. Th检测一般操作步骤：

2. 人/小鼠/大鼠Th检测方案：
 

人/大鼠Th1/Th2 CD3/CD8/IFN-γ/IL-4	人/大鼠Th17 CD3/CD8/IL-17A
小鼠Th1/Th2 CD3/CD4/IFN-γ/IL-4	小鼠Th17 CD3/CD4/IL-17A

3. 人全血Th检测为什么要CD3/CD8反设门？

PMA/Ionocymin刺激后，CD4分子发生内吞，表面检测到的CD4分子少，所以人全血Th检测要CD3/CD8反设门。

4. 如何判断PMA/Ionocymin刺激活化成功？

5. 刺激时间如何确定?

图：对刺激时间做了不同时间点的摸索，发现刺激5小时时效果最佳; 对于初次实验，需要做一下预实验，确定最佳条件。

6. 抗凝剂该如何选择？

由上图可知，抗凝剂选择肝素钠或肝素锂，不影响Th细胞的活化和细胞因子的分泌。

非肝素抗凝血(如ETDA、枸橼酸钠抗凝血)，可通过淋巴细胞分离液处理后，再进行刺激/阻断，仍然可以检测到细胞因子，如下图：
 

人EDTA抗凝血(Th1)

7. 大鼠全血检测Th的特殊性：

a) 大鼠全血（即便是肝素抗凝）如直接用PMA/Ionomycin刺激，在后续实验过程中无法溶血，影响检测；

解决办法：使用大鼠淋巴细胞分离液提取PBMC，分离后用PMA/Ionomycin刺激

b) 大鼠CD4在刺激后也会内陷，须用CD3/CD8反设门；

c) 目前还没有大鼠CD69抗体，也没有其他报道的可指示活化成功的指标，无法判断活化是否成功；
 

图：SD大鼠肝素抗凝血(A)、EDTA抗凝血(B)和枸橼酸钠抗凝血(C)经大鼠淋巴细胞分离液分离得到PBMC后，流式检测Th1。
 

8. 联科生物Th检测试剂盒：

 

目录号	存货名称	规格	目录价
70-KTH101-25/100	Human Th1/Th2 staining kit	25/100T	2235/8380
70-KTH117-25/100	Human Th17 staining kit	25/100T	2344/8790
70-KTH201-25/100	Mouse Th1/Th2 staining kit	25/100T	1620/6075
70-KTH217-25/100	Mouse Th17 staining kit	25/100T	1700/6375
70-KTH001-25/100	Human Th1/Th2/Th17 staining kit	25/100T	2800/10500