细胞凋亡概念及其特征

细胞凋亡的典型特征：

1）线粒体膜电位的丧失；

2）细胞膜PS（磷脂酰丝氨酸）的外翻；

3）细胞核凝缩和断裂。

凋亡(apoptosis)

程序性死亡，机体为更好地适应生存环境而采取的一种主动死亡过程。

 

凋亡研究热度分析

细胞凋亡与疾病：

 

凋亡不足	凋亡过度
肿瘤	心血管疾病
自身免疫病	血液系统疾病
病毒感染	重症肝炎
	退行性神经疾病
	如老年痴呆症
	帕金森症

细胞凋亡热点问题：

►   细胞接受胞外信号的刺激启动凋亡

►   胞内凋亡特异性蛋白酶（如Caspase）的活化

►   线粒体对凋亡的调控

►   Bcl-2蛋白家族对凋亡的调控

 

凋亡分期

早期事件： Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻 Ø线粒体受损 Ø细胞色素C释放	中期事件： ØCaspase 3/7/8/9活化	晚期事件： ØDNA片段化

凋亡检测 —— Annexin V

关键技术 9项

1，接种 对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml，以免引起凋亡

2，收集 上清消化全收

因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中，须先收集上清，离心收集沉淀，再消化收集贴壁细胞，合并上清和消化下来的细胞。

3，消化 Accutase

避免因消化过度使PS外翻，造成假阳性。

用eBioscience的Accutase酶替代胰酶，在多种细胞系中得到验证，对细胞更温和、长时间消化也没有影响。
（对凋亡不明显的实验强烈推荐）
使用细胞消化液－－实际效果比较

4，阳性质控 联科 Multisciences

没有明显的凋亡，该如何调节补偿以及设门？

联科凋亡试剂盒配备阳性质控液，使补偿调节so easy
 

5, 方案 4管 单双混合

染色：1, Blank、2, Annexin V、3, PI、4, Annexin V+PI

上机：1, Blank、2, 50%Blank +50%Annexin V、3, 50%Blank +50% PI、4, 50%Blank+50%Annexin V+PI、
             5, 50%Blank+25%Annexin V+PI+25%Annexin V

6，电压 足够大

大到快要超出边界。

7，细胞数量 足够多

多到细胞全部收集。

8，补偿 横平竖直

3、4象限横平；2、4象限竖直

9，漂亮图片

黄金分割（三分原则）。

 

关键技术 9项

1，接种：对数生长 2，收集 ：上清消化全收 3，消化：Accutase 4，阳性质控：联科 Multisciences 5，方案：单双混合 6，电压：足够大 7，细胞数量：足够多 8，补偿 ：横平竖直 9，漂亮图片 ：黄金分割